RACE PCR

Z Wikipedii, wolnej encyklopedii
Skocz do: nawigacja, szukaj

RACE PCR ((ang.) Rapid Amplification of cDNA Ends PCR – szybka amplifikacja końców cDNA) – technika biologii molekularnej, odmiana reakcji PCR, której celem jest poznanie dokładnej sekwencji jednego z końców RNA. W zależności od analizowanego końca stosowana jest metoda 3'RACE lub 5'RACE.

3'RACE[edytuj | edytuj kod]

W technice 3'RACE wykorzystywany jest naturalnie występujący wśród wielu mRNA łańcuch poliA, do którego komplementarnie łączy się DNA posiadające na swoim końcu 3' sekwencję poliT. Przyłączony fragment DNA jest następnie starterem dla reakcji odwrotnej transkrypcji. Następnym etapem jest dwukrotne przeprowadzenie reakcji PCR typu nested-PCR (pierwsza ze starterami zewnętrznymi, druga - z wewnętrznymi). Dwukrotna reakcja ma na celu dokładniejszą eliminację niepożądanych sekwencji (jeden z końców występuje powszechnie w wielu różnych mRNA, a celem eksperymentu jest amplifikacja tylko jednego). Tak otrzymany produkt możemy poddać sekwencjonowaniu.