Oczyszczanie kwasów nukleinowych na mikrokolumnach wirówkowych

Z Wikipedii, wolnej encyklopedii
Skocz do: nawigacja, szukaj
Mikrokolumna umieszczona w probówce Eppendorfa. Powiększenie przedstawia powierzchnię krzemionki z zaadsorbowanymi cząsteczkami wody (góra) i DNA w formie soli sodowej (dół)

Oczyszczanie kwasów nukleinowych na mikrokolumnach wirówkowych – metoda szybkiej izolacji kwasów nukleinowych z materiału biologicznego z zastosowaniem ekstrakcji do fazy stałej. Podstawą działania tej techniki jest selektywna i odwracalna adsorpcja kwasów nukleinowych na krzemionce stanowiącej wypełnienie kolumny. Kolumny z gotowym wypełnieniem, dopasowane do probówek wirówkowych Eppendorfa są dostępne handlowo.

Etapy procesu[1][2]:

  • Liza komórek – komórki obecne w próbce ulegają rozpadowi, a ich zawartość wylewa się do środowiska reakcji
  • Wiązanie do podłoża – do próbki dodaje się roztwór buforowy z dodatkiem etanolu lub izopropanolu. Uzyskany roztwór nanosi się na kolumnę umieszczoną w probówce Eppendorfa i wiruje się tak, aby cała faza ciekła w wyniku działania siły odśrodkowej przesączyła się przez złoże krzemionkowe. W warunkach odpowiedniego stężenia soli oraz pH następuje wiązanie kwasów nukleinowych na krzemionce, natomiast inne substancje opuszczają kolumnę wraz z roztworem.
  • Przemywanie – w celu usunięcia pozostałych zanieczyszczeń na kolumnę nanosi się bufor przemywający i ponownie wiruje.
  • Elucja – kolumnę przenosi się do czystej probówki, nanosi się bufor wymywający (lub czystą wodę) który powoduje desorpcję kwasów nukleinowych z podłoża, i po raz kolejny wiruje się. W probówce pod kolumną zbiera się roztwór oczyszczanego kwasu nukleinowego.

Przypisy[edytuj | edytuj kod]

  1. Robert S. Matson: Microarray Methods and Protocols. Boca Raton, Florida: CRC, 2008, s. 27–29. ISBN 1-4200-4665-9. (ang.)
  2. Anil Kumar: Genetic Engineering. New York: Nova Science Publishers, 2006, s. 101–102. ISBN 1-59454-753-X. (ang.)