DAPI
| DAPI | |||||||||||||||||
|
|||||||||||||||||
| Nazewnictwo | |||||||||||||||||
|
|||||||||||||||||
|
|||||||||||||||||
| Ogólne informacje | |||||||||||||||||
| Wzór sumaryczny | C16H15N5 | ||||||||||||||||
| Masa molowa | 277,32 g/mol | ||||||||||||||||
| Wygląd | żółty proszek[1] | ||||||||||||||||
|
|||||||||||||||||
| Identyfikacja | |||||||||||||||||
| Numer CAS | 47165-04-8 28718-90-3 (chlorowodorek) |
||||||||||||||||
| PubChem | 2954[2] | ||||||||||||||||
|
|||||||||||||||||
|
|||||||||||||||||
| Jeżeli nie podano inaczej, dane dotyczą stanu standardowego (25 °C, 1000 hPa) |
|||||||||||||||||
DAPI (nazwa systematyczna: 4',6-diamidyno-2-fenyloindol) – organiczny związek chemiczny, aromatyczna, heterocykliczna amina stosowana jako barwnik fluorescencyjny silnie wiążący się do DNA (dwuniciowego) na zasadzie interkalacji[3][4].
Powszechnie używany do wybarwiania jąder komórkowych lub chromosomów (poprzez wizualizację DNA) w mikroskopii fluorescencyjnej[5]. Ponieważ DAPI przenika przez nienaruszone błony biologiczne, może być używany do wybarwiania zarówno żywych komórek jak i utrwalonych[6].
W mikroskopii fluorescencyjnej DAPI jest wzbudzany światłem ultrafioletowym. Związany do DNA ma maksimum absorpcji przypadające na długość fali świetlnej równą 358 nm, a maksimum emisji przy 461 nm (kolor niebiesko-fioletowy). DAPI wiąże się także do RNA, aczkolwiek słabiej. Maksimum emisji DAPI związanego z RNA jest przesunięte do około 400 nm[7].
Niebieska emisja DAPI jest bardzo wygodna w obrazowaniu fluorescencyjnym przy użyciu kilku różnych barwników jednocześnie, ponieważ nie pokrywa się ona z emisją innych popularnych fluoroforów (na przykład zielonym GFP czy fluoresceiną).
Poza wybarwianiem jąder komórkowych, DAPI jest także używane do wykrywania mykoplazm[8] lub wirusów (także na zasadzie wiązania ich DNA)[9] w kulturach komórkowych.
Ponieważ DAPI wiążę się bardzo ściśle z DNA na zasadzie interkalacji i tym samym zaburza jego strukturę, związek ten jest toksyczny i mutagenny. Przy pracy z DAPI powinno się zachować szczególną ostrożność.
Po lewej obraz z nałożonymi sygnałami ze wszystkich kanałów barwnych, po prawej obraz z kanału z sygnałem pochodzącym tylko od DAPI.
Przypisy
- ↑ DAPI (pol.). Karta charakterystyki produktu Sigma-Aldrich dla Polski.
- ↑ DAPI – podsumowanie (ang.). PubChem Public Chemical Database.
- ↑ Chandra P., Mildner B., Dann O., Metz A. Influence of 4'-6'-diamidino-2-phenylindole on the secondary structure and template activities of DNA and polydeoxynucleotides.. „Mol Cell Biochem”. Dec 29;18. 2-3, s. 81-6, 1978. PMID 604784.
- ↑ Kreuter J., Liehl E. Protection induced by inactivated influenza virus vaccines with polymethylmethacrylate adjuvants.. „Med Microbiol Immunol”. Jul 4;165. 2, s. 111-7, 1978. PMID 672773.
- ↑ Lin MS., Alfi OS., Donnell GN. Differential fluorescence of sister chromatids with 4'-6-diamidino-2-phenylindole.. „Can J Genet Cytol”. 3 (18), s. 545-7, wrzesień 1977. PMID 63310.
- ↑ Hull HM., Hoshaw RW., Wang JC. Cytofluorometric determination of nuclear DNA in living and preserved algae.. „Stain Technol”. 5 (57), s. 273-82, wrzesień 1983. PMID 6758206.
- ↑ Manzini G., Xodo L., Barcellona ML., Quadrifoglio F. Interaction of DAPI with double-stranded ribonucleic acids.. „Nucleic Acids Res”. Dec 20;13. 24, s. 8955-67, 1986. PMID 4080554.
- ↑ Jagielski M., Zaleska M., Kaluzewski S., Polna I. [Applicability of DAPI for the detection of Mycoplasms in cell cultures]. „Med Dosw Mikrobiol”. 28. 2, s. 161-73, 1976. PMID 775226.
- ↑ Mildner B., Chandra P. [Molecular mechanism of action of diamidinephenylindole (DAPI). II. Effect of DAPI on the template activity of DNA and polydeoxynucleotides in the DNA-polymerase system from bacteria, eukaryotic cells and RNA tumor viruses (author's transl)]. „Cell Mol Biol Incl Cyto Enzymol”. 25. 6, s. 399-407, 1980. PMID 94275.
